磷酸、醋酸以及液相分析中常用到的酸（常見的還比如甲酸，三氟乙酸等），他們的主要區(qū)別和選擇在于：

實(shí)例：甘草酸銨含量測(cè)定液相色譜分析，結(jié)構(gòu)式：

分析:  主峰包含雜質(zhì)峰，分離度降低。

3）保持原流動(dòng)相比例，改變柱溫為25度，效果圖：

分析：此條件下分離度>1.5，雜質(zhì)距離主峰較遠(yuǎn)。

4）使用同款色譜柱重現(xiàn)，效果圖：

分析：柱間分離情況及保留時(shí)間有差異。

分析：此條件下分離度仍不夠。

2）改變流動(dòng)相比例為甲醇：冰醋酸：水=72：0.3：28，柱溫40，流速1mL/min，Topsil^? C18（4.6*250mm，5μm），效果圖：

分析：分離度>1.5，達(dá)到要求。

4）多針重現(xiàn)，效果圖：

分析：保留時(shí)間較小差異，分離度良好。

結(jié)論：使用36.5%醋酸的流動(dòng)相體系時(shí)，在合格的色譜柱條件下，選擇4支重現(xiàn)，保留時(shí)間差異大。可從以下角度分析：

1）該物質(zhì)本身就是一個(gè)兩性離子，有弱酸和弱堿離子，在此條件下，流動(dòng)相本身的緩沖作用很有限。

2）流動(dòng)相的pH在4-5之間，這時(shí)候在反相C18中硅羥基的解離狀態(tài)是更活躍的時(shí)候（硅羥基的pKa在4.2至4.5之間），物質(zhì)對(duì)填料狀態(tài)以及柱子之間的差異很敏感，體現(xiàn)在用不同支的色譜柱差異大。在檢測(cè)甘草及其制品中的該物質(zhì)時(shí)，均出現(xiàn)過這樣的現(xiàn)象。

3）醋酸屬揮發(fā)性酸，在使用36.5%乙酸和99.5%冰乙酸時(shí)，等量的變化在兩種流動(dòng)相體系中的影響程度不同，引起色譜結(jié)果差異性不同。