采用增加離子強(qiáng)度的方法洗脫蛋白質(zhì)時(shí)，通常選用某種非緩沖鹽類(lèi)，更常用的是NaCl，添加到起始緩沖液中，構(gòu)成了洗脫緩沖液。在進(jìn)行色譜分離時(shí)，洗脫緩沖液中的緩沖物質(zhì)固然會(huì)影響到色譜效果，實(shí)際上非緩沖鹽的種類(lèi)和性質(zhì)同樣會(huì)影響到色譜時(shí)的分辨率和選擇性，使用不同的非緩沖鹽離子時(shí)，可能造成不同物質(zhì)被洗脫的先后順序發(fā)生變化，因此非緩沖鹽的選擇同樣具有重要意義。

在前面離子交換理論部分討論過(guò)，價(jià)態(tài)高的離子與交換劑的結(jié)合力更強(qiáng)，所以一般情況下，多價(jià)離子是比一價(jià)離子更好的置換離子，它們能使蛋白質(zhì)比較早被洗脫下來(lái) （保留值?。?。所以在陽(yáng)離子交換劑上，蛋白質(zhì)的保留值與置換離子的關(guān)系為：Ba²⁺＜Ca²⁺＜Mg²⁺＜NH₄₊＜K⁺＜Na⁺＜Li⁺，但也存在例外，比如對(duì)于溶菌酶來(lái)說(shuō)，NH₄₊是比Mg²⁺更有效的置換離子。在選擇置換離子時(shí)，應(yīng)當(dāng)考慮到多方面的因素，強(qiáng)的置換離子能有效縮短色譜時(shí)間，但往往也降低蛋白質(zhì)回收率。一般情況下選擇置換能力居中的鹽離子較為合適，在洗脫與交換劑牢固結(jié)合的蛋白質(zhì)時(shí)，選用強(qiáng)的置換離子具有優(yōu)勢(shì)。

不但置換離子，洗脫鹽中與功能基團(tuán)帶同種電荷而不參與離子交換過(guò)程的離子也會(huì)影響到蛋白質(zhì)的色譜行為，原因也有多種。有些是因?yàn)殡x子與蛋白質(zhì)發(fā)生作用導(dǎo)致的。此外，二價(jià)離子如Ca²⁺和Mg²⁺能與蛋白質(zhì)分子中的酰胺基形成復(fù)合物而影響到其色譜行為。

總之，離子對(duì)色譜行為的影響是多方面的，沒(méi)有一定的規(guī)律。在首次進(jìn)行色譜分離時(shí)，可優(yōu)先選擇比較通用的一些緩沖物質(zhì)和鹽類(lèi)，在此基礎(chǔ)上再進(jìn)一步優(yōu)化。

在有些情況下，在進(jìn)行離子交換時(shí)還會(huì)添加一些其他的化合物，其作用主要有：增加蛋白質(zhì)的溶解度，提高色譜分辨率，保護(hù)待分離物質(zhì)等。大多數(shù)蛋白質(zhì)是溶于水的，但也有部分蛋白質(zhì)疏水性比較強(qiáng)，在水中的溶解度很小，這使得色譜操作難于實(shí)現(xiàn)。具體例子是膜蛋白的分離。膜蛋白存在于生物膜中，其表面是疏水區(qū)，與生物膜中疏水性的脂質(zhì)成分以疏水相互作用結(jié)合，這類(lèi)蛋白在水中是不溶的或溶解度很低。向溶液中添加非離子型或兼性離子型去污劑可以使膜蛋白溶解并分散在水溶液中，便于色譜的進(jìn)行。有機(jī)溶劑（如氯仿、甲醇等）也能增加疏水性蛋白質(zhì)的溶解度，而且由于有機(jī)溶劑降低溶液的介電常數(shù)，使得蛋白質(zhì)與交換劑之間的靜電作用力更強(qiáng)，吸附更為牢固。

某些情況下，添加特定的物質(zhì)還能提高色譜時(shí)的分辨率。例如，在分離一些蛋白質(zhì)時(shí)，添加甜菜堿或?；撬崮軠p少蛋白聚集體的形成及其與交換劑的結(jié)合，從而提高了分辨率。有的中性聚合物如聚乙二醇（PEG）能與蛋白質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)溶液中的水分子，這將增加蛋白質(zhì)與離子交換劑的相互作用而提高分辨率。分離過(guò)程中有時(shí)還需添加酶抑制劑。例如在蛋白質(zhì)分離過(guò)程中，樣品體系中如果有蛋白酶存在，會(huì)造成目的蛋白被水解，使回收率下降，添加蛋白酶抑制劑能夠有效保護(hù)目的蛋白。絲氨酸蛋白酶常用的抑制劑是苯甲磺酰氟，巰基蛋白酶常用的抑制劑是碘乙酰胺，金屬蛋白酶可采用金屬螯合劑作為抑制劑。