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色譜柱傷不起!關(guān)于液相色譜柱使用的6大注意事項

2023-05-23

喜愛養(yǎng)花的人都知道,不同的花卉有不同的特性,對光照、水分、溫濕度的需求都不相同。要了解這些,才能使花草處于健康的狀態(tài),時不時為你鮮花綻放。反之,不了解這些,花草就處于不健康狀態(tài),不僅不開花,還會把花養(yǎng)死。

那么,液相色譜柱做為比較昂貴的色譜耗材,也具有很多特性,如果不了解這些注意事項,一不留神就會用壞。

關(guān)于液相色譜柱的使用注意事項,  一般有以下幾點:

01 過濾流動相和樣品

流動相通常由水或緩沖溶液與有機溶劑混合而成。原則上,所有經(jīng)過色譜柱的流動相均應(yīng)過濾,但在實際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別:當(dāng)有機溶劑用色譜純級,水用石英亞沸水或其它超純水時,在能確保水和有機溶劑的質(zhì)量且沒有受到污染時,過濾并無更多實際意義。

當(dāng)流動相中含有緩沖鹽時,則過濾是必要的,如前所述,當(dāng)緩沖溶液放置一段時間,在使用前還應(yīng)重新過濾(含有緩沖鹽的流動相,長菌較快,建議現(xiàn)用現(xiàn)配)。

所配制的樣品試液在注入流路系統(tǒng)前均要經(jīng)0.45μm(0.22μm則更好)孔徑濾膜過濾。要注意區(qū)分水系和油系,二者不可混用,以防止濾膜溶解而造成污染。

裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換,以避免濾器因過載而起不到過濾作用。

02 凈化樣品

當(dāng)樣品中含有對色譜柱有損害的化學(xué)成分,如產(chǎn)生yong久性吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機分子和強吸附性物質(zhì),以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團(tuán)離子。在進(jìn)樣前應(yīng)盡可能對樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。

03 避免過高柱壓

雖然高效液相色譜柱能耐受的壓力可達(dá)6000psi (磅/平方英寸),但過高及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命,避免的方法是:

1)柱壓過高時,盡可能采用較小的流速,以不超過柱zui大允許壓力的一半為宜。

2)當(dāng)流速較大時,應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位。

3)使用手動進(jìn)樣閥時,進(jìn)樣閥的切換要盡可能的快。否則超過20%的壓力沖擊會很快使柱報廢。當(dāng)使用多柱聯(lián)用時,柱切換要避免在高壓下進(jìn)行。

04 注意溫度和酸堿度

一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱zui高使用溫度不超過60℃,以低于40℃為宜,特別是在流動相pH接近使用限度時,更應(yīng)降低使用溫度。

溫度過高會加快鍵合相的水解和硅膠的溶解,從而使填料性質(zhì)改變,柱床塌陷,降低柱效,改變峰形。

請您留意色譜柱說明書中的pH適用范圍,目前市面上大部分鍵合硅膠色譜柱表示的pH適用范圍是2-10,但在實際使用時應(yīng)避免極端的pH條件。(當(dāng)pH≤2時,建議使用月旭Ultimate? LP系列色譜柱;當(dāng)pH≥8時,建議使用月旭Xtimate?系列色譜柱)。若您原有的色譜柱在偏堿性條件(pH≥8)下使用,可通過以下方法避免柱損害:

1)在泵和進(jìn)樣閥之間加裝預(yù)柱(飽和柱)來飽和流動相。

2)降低使用溫度。

3)檢驗完畢后立即用與所使用的流動相互相混溶的“溫和溶劑”徹底清洗。

05 正確及時的沖洗

開始試驗前,應(yīng)了解柱中當(dāng)前是何種溶劑。對于新色譜柱,如無特殊說明均為評價報告中所用流動相。柱中當(dāng)前溶劑一定要與分析樣品所用流動相互溶,如不能混溶,要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。

06 加裝保護(hù)柱

保護(hù)柱的作用:過濾掉來自流動相和樣品的化學(xué)“拉圾”同時也可以有效除去流動相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口、進(jìn)樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有不同孔徑的在線過濾器,但在線過濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污染,因此,加裝保護(hù)柱是必要的,特別是在分析中藥、中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時更是保護(hù)分析柱必不可少的措施。

保護(hù)柱填料應(yīng)與分析柱一致,粒徑可較分析柱大。保護(hù)柱屬消耗品,經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析(50~100次)后,出現(xiàn)柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時,應(yīng)考慮更換保護(hù)柱。

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