2023-01-17
固相萃取,簡稱SPE,是近年發(fā)展起來一種樣品預(yù)處理技術(shù),由液固萃取柱和液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來,主要用于樣品的分離、純化和濃縮,與傳統(tǒng)的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率,更有效的將分析物與干擾組分分離,減少樣品預(yù)處理過程,操作簡單、省時、省力。廣泛應(yīng)用在醫(yī)藥、食品、環(huán)境、商檢、化工等領(lǐng)域。
在實驗當(dāng)中,使用SPE的過程中常常會遇到各種各樣的問題,如回收率、流速、極性等問題。而具體問題需要具體分析,因為面對不同實驗,各個實驗室的實驗技術(shù)、環(huán)境及時間都是不一樣的,這也導(dǎo)致問題原因也各不相同。
問題一:回收率偏低 SPE的回收率偏低是更常見的問題,更常見的原因可能就是目標(biāo)物沒有被小柱填料保留,或者目標(biāo)物沒有完全洗脫。 原因1:SPE柱的極性不合適。 解決方法:選擇其他低極性或者選擇性弱的SPE柱。 原因2:洗脫溶劑不夠強,無法將目標(biāo)物化合物從SPE柱上洗脫。 解決方法:改變洗脫溶劑的pH,以增加其對目標(biāo)化合物的親和力。 原因3:洗脫溶劑體積太小。 解決方法:增加溶劑體積。 問題二:流速問題 在同一批SPE產(chǎn)品中,SPE的流速可能會存在快慢不一的情況,而SPE流速過快不利于目標(biāo)化合物在填料上的保留,也會極大影響溶劑與目標(biāo)化合物或者填料的相互作用,從而影響保留或者洗脫過程。過慢則會增加實驗時間。 原因1:填料量、緊密度等小柱因素會影響流速的快慢。 解決方法:可借助固相萃取裝置或者泵流操作架等進行流速控制,流速低于5mL/min時結(jié)果較為穩(wěn)定,部分實驗需更慢。流速較慢則可施加外力增速。 原因2:樣品存在過多的顆粒,小柱堵塞,導(dǎo)致流速降低。 解決方法:對樣品進行過濾或者離心。 原因3:樣品溶液粘度太大。 解決方法:可用溶劑對樣品進行稀釋。 問題三:如何確定吸附量 填料存在更大吸附量上限,當(dāng)超過更大吸附量上限時會造成小柱吸附超載,從而導(dǎo)致目標(biāo)物流失。同時在未規(guī)定SPE規(guī)格的情況下,也可根據(jù)吸附容量去計算合適的填料規(guī)格。 1.硅膠基質(zhì):柱容量一般不超過SPE填料質(zhì)量的5%,例如100mg/mL的C18小柱可以保留5mg的化合物。 2.聚合物基質(zhì):柱容量是硅膠基質(zhì)吸附劑的3倍,一般不超過SPE填料質(zhì)量的15%,例如100mg/mL的BRP小柱可以保留15mg的化合物。 3.離子交換吸附劑:交換容量為0.25-1mmol/g,1mmol/g表示1g吸附劑能吸附1mmol的一價帶電物質(zhì)。 問題四:重現(xiàn)性差 在使用固相萃取小柱進行樣品前處理時,若出現(xiàn)萃取效果重現(xiàn)性差,可能的原因及改進辦法如下: 原因1:上樣前柱床干涸。 解決辦法:重新活化并平衡SPE小柱。 原因2:過柱流速過快。 解決辦法:降低流速。 原因3:清洗溶劑洗脫能力太強。 解決辦法:先讓洗脫液滲入小柱,然后再對小柱進行抽真空或者加壓,并控制流速1-2mL/min。 原因4:超出小柱的載樣能力。 解決辦法:減小載樣量,或者換用填料規(guī)格更大的SPE小柱。 問題五:凈化效果不理想 在使用SPE的過程中,可能會因為小柱、溶劑、實驗技術(shù)等的選擇,導(dǎo)致更終的凈化結(jié)果達(dá)不到預(yù)期效果。 原因1:凈化模式不適用。 解決辦法:可優(yōu)化凈化模式,通常而言采用保留目標(biāo)化合物的模式會比保留雜質(zhì)的模式凈化效果好,如果正在分析的項目為某一種或某一類化合物分析,可以采用保留目標(biāo)化合物的凈化模式。如果不止一種SPE柱可用于目標(biāo)化合物的凈化時,也可挑選選擇性好的吸附劑,一般離子交換>正相>反相。 原因2:淋洗液或者洗脫液不適用。 解決辦法:根據(jù)實驗優(yōu)化淋洗液或者洗脫液。 原因3:SPE小柱當(dāng)中存在少量干擾物。 解決辦法:對SPE小柱進行合理處理,將SPE柱有效活化。 產(chǎn)品參數(shù)