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關(guān)于ELSD蒸發(fā)光散射檢測器的知識專輯(上)

2022-09-22

Hello小伙伴大家好,想必大家實驗室都有蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)吧,對于脂類、糖類、氨基酸、聚合物等無紫外響應(yīng)的待測物我們還是得選擇通用型檢測器,今天小編匯總了一篇ELSD干貨,助力你的進階之路,記得收藏&分享噢。

ELSD的工作原理 

ELSD的檢測原理分三步,三、二、一,走起:

1、霧化過程

用惰性氣體或凈化空氣將色譜柱流出物霧化,流動相和氣體混合噴成均勻的霧滴。

2、蒸發(fā)過程

在漂移管中將流動相揮發(fā),霧滴經(jīng)過加熱的漂移管,流動相被蒸發(fā),溶質(zhì)形成極細的顆粒。

3、檢測過程

測定留下來的樣品顆粒的光散射,溶質(zhì)顆粒氣流在檢測池被光束照射,其散射光被光電二極管轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘栞敵觥?/span>

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ELSD檢測的優(yōu)點及缺點

ELSD可作為高效液相色譜、高速逆流色譜、超臨界流體色譜等色譜的檢測器。作為新型的通用型檢測器,它具有許多優(yōu)點:首先,ELSD檢測不依賴于樣品的光學性質(zhì),只要揮發(fā)性小于流動相的物質(zhì),都可以在ELSD上產(chǎn)生響應(yīng)。其次,ELSD可以很好的支持梯度洗脫,蒸發(fā)光散射檢測可以消除流動相配比變化對基線產(chǎn)生的影響。另外,輔助載氣提高了檢測靈敏度,保持檢測池內(nèi)的清潔,避免污染。

但是,相對于UV檢測器,ELSD檢測也有一定的特殊性。ELSD檢測要求流動相及流動相中加入的修飾劑必須有良好的揮發(fā)性,這樣就使非揮發(fā)性的緩沖鹽的應(yīng)用受到了限制。與UV檢測器相比,ELSD檢測的靈敏度略低。

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影響ELSD檢測性能的基本因素

操作條件的選擇,選擇合適的操作條件可提高方法的靈敏度,操作條件的選擇取決于樣品的揮發(fā)性、流動相的組成及其流速。

流動相組成及流速的選擇,流動相的揮發(fā)性越好,方法的靈敏度越高。流動相的流速越低,相應(yīng)的信號越強。漂移管溫度對基線水平和噪音的影響并無明顯的規(guī)律性。更優(yōu)溫度應(yīng)為在流動相基本揮發(fā)的基礎(chǔ)上,產(chǎn)生可接受噪音的更低溫度。載氣流速是影響檢測性能的一個很重要的因素。更優(yōu)載氣流速應(yīng)是在可接受噪音的基礎(chǔ)上,產(chǎn)生更大檢測響應(yīng)值時的更低流速。

ELSD使用中常見問題

01、改變漂移管溫度后儀器的響應(yīng)不一樣

溫度太低,基線水平較高,流動相得不到充分揮發(fā);溫度太高,會使流動相沸騰,反而增加背景噪聲,同時還有可能導致被測樣品的部分揮發(fā),降低信噪比。更優(yōu)的溫度應(yīng)為流動相基本揮發(fā)基礎(chǔ)上,產(chǎn)生可接受噪音的更低溫度。

ELSD5450屬于低溫性蒸發(fā)光散射檢測器,可以用低于溶劑沸點的溫度揮發(fā)溶劑。例如:純水的沸點為100度,調(diào)節(jié)揮發(fā)溫度為40度就可以達到水完全揮發(fā)的效果,如果是甲醇,溫度35度就可達到。所以日常實驗中的梯度流動相,多種溶劑混合后的沸點是低于100度的,我們把溫度設(shè)置在40度就可以了。不是說溫度設(shè)置在60度80度就不可以,而是40度是它更佳的一個揮發(fā)溫度,揮發(fā)溫度越低樣品形成的顆粒越大,ELSD的響應(yīng)值就越高。

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02、改變載氣流速后儀器的響應(yīng)不一樣

其它條件不變的情況下,載氣流速越小,形成的物質(zhì)粒子半徑越大,對光的散射能力越強,相應(yīng)的響應(yīng)信號越大,更優(yōu)的載氣流速應(yīng)為可接受噪音基礎(chǔ)上并且產(chǎn)生較高響應(yīng)的更低流速。

03、儀器一直顯示未就緒狀態(tài)

不同溶劑的揮發(fā)性不同,儀器較長時間保存在易揮發(fā)的溶劑中,由于溶劑的揮發(fā)而導致液相的脫氣機真空不夠而儀器一直顯示未就緒狀態(tài)。遇到這種情況后要先更換揮發(fā)性較低的溶劑(如異丙醇)對儀器的每個管路分別Purge 10分鐘以上,然后儀器的噪音會逐漸降低,軟件也會由未就緒變成空閑狀態(tài)。然后就可以更換需要的流動相進行平衡。

04、儀器的基線很亂,無規(guī)律狀態(tài),噪聲范圍很大

這種情況多半是漂移管污染了,需要對漂移管進行清洗。按照儀器說明書的操作用適合的工具拆開儀器,用專用的清理刷使用乙醇和清水進行清洗。如果使用氨基柱,并將氨基柱用于反相,在水的作用下,氨基會流失,噪聲就會比較大,可以通過提高有機相比例或更換其他種類的色譜柱來解決。

05、不出峰或峰太小

● 溫度設(shè)置過低,流動相霧化不充分造成。

● 溫度設(shè)置過高,待測組分揮發(fā)。

● 漂移管臟,造成低噪音。

● 廢液管沒入廢液瓶中,廢氣管內(nèi)有液體,廢液管必須在液面以上,在虹吸管形成液封。

● 排氣不暢,或外界抽氣壓力過大。

06、序列太長時,同一樣品在序列前后的峰面積異較大

遇到這種情況就要考慮同一序列中需要排的樣品數(shù)了。分析原因,可能是流動相組成中不同成分的揮發(fā)性不一致,導致運行到后面的流動相中不同組分的比例發(fā)生變化,出峰情況也就不一樣了;還有可能在運行的過程中樣品顆粒有少量殘留在儀器中沒有排出而導致后面的樣品面積增大。使用ELSD檢測時,可減少同一序列的樣品數(shù)量,檢測的數(shù)量少了,相對儀器的負擔也會減少,維護起來也方便。

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07、前處理引入污染

由于選擇ELSD作為檢測器是用于常量或痕量分析,多數(shù)時需要對樣品或預(yù)處理中的萃取液進行濃縮,這時需要考慮溶液中痕量干擾物,如塑料制品中的增塑劑,在多數(shù)萃取時使用氯仿類萃取液時,會溶解增塑劑,如果直接上色譜分析,ELSD不會明顯顯現(xiàn),一旦進行濃縮后,增塑劑濃度變得很大,可以被ELSD檢出。

08、結(jié)果計算

在ELSD的方法中通常應(yīng)用對數(shù)相關(guān)的方式進行線性回歸,因為在ELSD的檢測過程中隨著濃度的增加,信號響應(yīng)的方差可能會隨之增大,為了使方差恒定,可以采用濃度和峰面積取對數(shù)后的線性回歸,并且在實際供試品含量計算時需要帶入線性方程進行計算,在ELSD的方法中不宜采用單點外標,至少采用兩點的曲線法進行定量計算。

出現(xiàn)問題時應(yīng)逐一排查流動相(水/甲醇/乙腈/酸等),氣源,色譜柱,儀器管路。

關(guān)于儀器故障排查以及維護操作我們下次再分享,關(guān)注月旭科技,分享知識,助力你的進階之路,下一個實驗室主任就是你了!

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