在技術(shù)轉(zhuǎn)移過(guò)程中，或者說(shuō)是方法在不同實(shí)驗(yàn)室間重現(xiàn)的時(shí)候，通常會(huì)遇到分離度變化的問(wèn)題。分離度如果變大一般情況下就不會(huì)在意這個(gè)問(wèn)題了；而如果變小，特別是本身就在限值附近的時(shí)候，對(duì)我們來(lái)說(shuō)就是一種挑戰(zhàn)。

那么，接下去就的策略就是各種排查。人員操作？流動(dòng)相？色譜柱？?jī)x器？等等。在經(jīng)過(guò)一系列排查之后，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題出在儀器上？Oh！這個(gè)問(wèn)題好難！換個(gè)柱子換個(gè)人都簡(jiǎn)單，可是換儀器？別人家的實(shí)驗(yàn)室我做不了主?。∨?！小編也做不了主。但是小編或許能就簡(jiǎn)單的儀器問(wèn)題提供一個(gè)簡(jiǎn)單的解決方案——如果是因?yàn)閿U(kuò)散引起的話(huà)！

在開(kāi)始今天的話(huà)題之前，我們有必要先看看分離度的公式。放寬心，今天不涉及到計(jì)算。（理論基礎(chǔ)是有必要的，因?yàn)槲覀兡壳暗拇蟛糠盅芯慷际腔谇叭说幕A(chǔ)理論研究。）

上述給出了兩個(gè)分離度公式，從公式可以看出，無(wú)論是基于半峰寬W50的分離度計(jì)算，還是基于tangent的峰寬Wt的計(jì)算，當(dāng)峰寬/半峰寬增加的時(shí)候，分離度Rs都是減少的。

當(dāng)我們的組分從進(jìn)樣器經(jīng)過(guò)一定的管路到達(dá)柱子中，再經(jīng)過(guò)柱子后通常又經(jīng)過(guò)了一小段的管路，更后到達(dá)流通池中被檢測(cè)到。在這個(gè)過(guò)程當(dāng)中，組分因?yàn)榉肿娱g的運(yùn)動(dòng)發(fā)生擴(kuò)散，從而具有一定的峰寬。見(jiàn)示意圖：

由上述示意圖可以很明顯的看到，組分?jǐn)U散的越厲害，譜帶展寬越大，峰寬越寬。

再回到我們的分離度公式，前文說(shuō)過(guò)，峰寬越寬，分離度越小——這就是擴(kuò)散帶來(lái)的對(duì)分離度的影響。

那么，怎么解決這個(gè)問(wèn)題呢？

將原有內(nèi)徑較大的管路換成內(nèi)徑更小的管路；將原有較長(zhǎng)的管線(xiàn)換成更短的管線(xiàn)。

用核殼柱替換原有的全多孔柱，由于核殼柱顆粒均勻度較高，加之較短的擴(kuò)散路徑，峰寬就越窄，柱效往往更高。

將標(biāo)準(zhǔn)流通池?fù)Q成半微量流通池或者是微量流通池——這一項(xiàng)更改相對(duì)上述兩項(xiàng)會(huì)麻煩一些，因?yàn)檫€需要考慮前面管線(xiàn)的影響，不能簡(jiǎn)單把流通池?fù)Q了就萬(wàn)事大吉了。

講到這里，擴(kuò)散的問(wèn)題就講完了。而關(guān)于上述現(xiàn)象及處理方法其實(shí)都是基于色譜基礎(chǔ)理論——速率理論，速率理論不止適用于LC,也適用于GC。當(dāng)然，要用單一的模型解決所有問(wèn)題也是不現(xiàn)實(shí)的。不過(guò)對(duì)于我們今天的擴(kuò)散問(wèn)題，速率理論已經(jīng)能很好的解決了。

另外，講到這里需要額外說(shuō)一點(diǎn)關(guān)于儀器及柱子的問(wèn)題。液相色譜發(fā)展的時(shí)間已經(jīng)不短了。那么，針對(duì)今天擴(kuò)散的話(huà)題，在你使用時(shí)間較久的儀器或柱子的時(shí)候，特別是用快速柱（3.5/3.0μm或以下粒徑的色譜柱）時(shí)，很有可能就會(huì)碰到譜帶展寬而造成的分離度降低的問(wèn)題，因?yàn)樵缦鹊膬x器Dwell體積是比較大的；而當(dāng)你使用更新款的UPLC/UHPLC時(shí)，也別沾沾自喜，隨手一拿就是250mm/5μm的柱子，這也可謂有些暴殄天物。老板給了你一臺(tái)邁巴赫，你把它開(kāi)成了電動(dòng)三輪。小編一直說(shuō)，合適的才是更好的，對(duì)于較長(zhǎng)的柱子，也許您家的“老爺機(jī)”也能有優(yōu)異的表現(xiàn)，且不輸于你的UPLC/UHPLC;而當(dāng)您使用UPLC/UHPLC時(shí)，請(qǐng)給它相應(yīng)的更小的色譜柱，如此才能發(fā)揮出它更大的優(yōu)勢(shì)。不說(shuō)儀器廠(chǎng)商投入多少研發(fā)成本才有了現(xiàn)在的低Dwell體積的儀器，想想你家老板可是真金白銀才換來(lái)的新款儀器，別讓它成為擺設(shè)啦！理解，并且更大程度的發(fā)揮出優(yōu)勢(shì)，才是更高效更合理的。而我們，就是發(fā)揮這種作用的紐帶！共勉！