首先，小編歸納了guo家標(biāo)準(zhǔn)中的不同基質(zhì)樣品的提取、凈化方法。

果蔬汁、果蔬漿類(lèi)樣品：

醬菜、發(fā)酵豆制品類(lèi)樣品：

面包、糕點(diǎn)、焙烤食品餡料、復(fù)合調(diào)味料類(lèi)樣品：

令小編沮喪的是，除去甲醇后，回收率仍然不理想（15.35%）。小編收集了上樣、淋洗步驟的流出液上機(jī)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)目標(biāo)物未被檢出。結(jié)合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，導(dǎo)致目標(biāo)物回收率低的情況可能出現(xiàn)在提取環(huán)節(jié)或固相萃取洗脫環(huán)節(jié)，目標(biāo)物可能仍保留在小柱上。

然而，整個(gè)操作過(guò)程實(shí)在太繁瑣、太不確定！再去追究哪一步出現(xiàn)問(wèn)題要花大量時(shí)間！

綜合整個(gè)操作流程，涉及兩個(gè)調(diào)pH步驟，引入的誤差無(wú)法準(zhǔn)確控制；樣品提取液較少的時(shí)，繁瑣的操作難免導(dǎo)致目標(biāo)物損失。一方面，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度不好保障，另一方面，繁瑣的流程限制了做樣速度，增加方法改良的時(shí)間成本。這樣的方法即便有效也難實(shí)現(xiàn)大批量樣品的快速處理。

那么換個(gè)思路進(jìn)行方法優(yōu)化如何？

小柱的選型要由目標(biāo)物性質(zhì)決定，小編首先看了一下脫氫乙酸的化學(xué)性質(zhì)：

脫氫乙酸是吡喃的衍生物，常溫下呈晶體狀。脫氫乙酸晶體難溶于水，在甲醇中溶解度5%（w/w，25℃），水溶液弱酸性，飽和溶液pH=4。其鹽類(lèi)脫氫乙酸鈉在水中溶解度較大。

 脫氫乙酸 

脫氫乙酸鈉          

這里小編發(fā)現(xiàn)，脫氫乙酸是一種有機(jī)弱酸，其離子化狀態(tài)是弱陰離子。那么，如果能使脫氫乙酸在提取和固相萃取富集環(huán)節(jié)保持離子化狀態(tài)，是否可以利用離子交換機(jī)制選擇小柱呢？

考慮至此，小編選定了月旭P-SAX小柱（強(qiáng)陰離子交換柱）作為SPE凈化柱。使用P-SAX小柱回收脫氫乙酸時(shí)，需要注意兩個(gè)環(huán)節(jié)：

優(yōu)化后

在進(jìn)行了進(jìn)一步優(yōu)化后，更終的實(shí)驗(yàn)步驟、譜圖、回收率如下（以洋蔥基質(zhì)為例）：

1、提取

稱(chēng)取2g樣品于50mL離心管，加入5mL氫氧化鈉溶液（1mol/L），定容至25mL，渦旋混勻2min，超聲提取15min，8000r/min離心5min，上清液待凈化。

2、凈化

SPE柱：月旭Welchrom? P-SAX，規(guī)格：200 mg/6mL。

活化：5mL甲醇，5mL水，棄去

上樣：10ml待凈化液上樣，棄去

淋洗：5mL水，棄去，抽干

洗脫：5mL10%甲酸甲醇，收集于15ml離心管中，抽干

濃縮：40℃氮吹至約200μL，用水定容至2ml，過(guò)0.45μm水系濾膜后上HPLC檢測(cè)。

3、儀器條件

色譜柱：月旭Ultimate?XB-C18, 4.6×250mm, 5μm

流動(dòng)相：0.02mol/L乙酸銨（pH=10）：甲醇=35:65

柱溫：35℃

進(jìn)樣量：20μL
檢測(cè)波長(zhǎng)：484nm

流速：1.0mL/min